Javascript on praegu teie brauseris keelatud.Kui javascript on keelatud, ei tööta mõned selle veebisaidi funktsioonid.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprezi teadusosakond, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Kataloonia, Hispaania * Nendel autoritel on selle töö kohta mõningaid teadmisi Equal panuse taust: Hüaluroonhape (HA) on looduslikult esinev polüsahhariid, mida kasutatakse esteetilistel eesmärkidel nahatäiteainete tootmisel.Kuna selle poolestusaeg inimese kudedes on mitu päeva, on HA-põhised nahatäiteained keemiliselt modifitseeritud, et pikendada nende eluiga kehas.Kõige tavalisem modifikatsioon kaubanduslikes HA-põhistes täiteainetes on 1,4-butaandiooldiglütsidüüleetri (BDDE) kasutamine ristsiduva ainena HA-ahelate ristsidumiseks.Jääk või reageerimata BDDE loetakse mittetoksiliseks, kui see on <2 miljondikosa (ppm);seetõttu tuleb patsiendi ohutuse tagamiseks kvantifitseerida BDDE jääk lõplikus nahatäidises.Materjalid ja meetodid: selles uuringus kirjeldatakse BDDE ja HA vahelise ristsidumise reaktsiooni kõrvalsaaduse tuvastamist ja iseloomustamist leeliselistes tingimustes, kombineerides vedelikkromatograafiat ja massispektromeetriat (LC-MS).Tulemused: Pärast erinevaid analüüse leiti, et HA-BDDE hüdrogeeli desinfitseerimiseks kasutatud leeliselised tingimused ja kõrge temperatuur soodustasid selle uue kõrvalsaaduse, "propüleenglükoolitaolise" ühendi moodustumist.LC-MS analüüs kinnitas, et kõrvalsaadusel on sama monoisotoopne mass kui BDDE-l, erinev retentsiooniaeg (tR) ja erinev UV-neelduvus (λ=200 nm).Erinevalt BDDE-st täheldati LC-MS analüüsis, et samades mõõtmistingimustes on sellel kõrvalsaadusel suurem avastamiskiirus 200 nm juures.Järeldus: need tulemused näitavad, et selle uue ühendi struktuuris ei ole epoksiidi.Arutelu on avatud, et hinnata selle uue kõrvalsaaduse riske, mida leitakse HA-BDDE hüdrogeeli (HA dermaalne täiteaine) tootmisel kaubanduslikel eesmärkidel.Märksõnad: hüaluroonhape, HA dermaalne täiteaine, ristseotud hüaluroonhape, BDDE, LC-MS analüüs, BDDE kõrvalsaadus.
Hüaluroonhappel (HA) põhinevad täiteained on kõige levinumad ja populaarsemad kosmeetikatoodetes kasutatavad nahatäiteained.1 See naha täiteaine on hüdrogeel, mis koosneb tavaliselt >95% veest ja 0,5–3% HA-st, mis annab neile geelitaolise struktuuri.2 HA on polüsahhariid ja selgroogsete rakuvälise maatriksi põhikomponent.Üks koostisosadest.See koosneb (1,4)-glükuroonhappe-β (1,3)-N-atsetüülglükoosamiini (GlcNAc) korduvatest disahhariidiühikutest, mis on ühendatud glükosiidsidemetega.See disahhariidide muster on kõigis organismides ühesugune.Võrreldes mõne valgupõhiste täiteainetega (nagu kollageen), muudab see omadus HA-st väga bioloogiliselt ühilduvaks molekuliks.Nendel täiteainetel võib olla aminohappejärjestuse spetsiifilisus, mille võib ära tunda patsiendi immuunsüsteem.
Naha täiteainena kasutamisel on HA peamiseks piiranguks selle kiire liikumine kudedes, mis on tingitud spetsiifilise ensüümide perekonna, mida nimetatakse hüaluronidaasideks, olemasolust.Siiani on kirjeldatud mitmeid HA struktuuri keemilisi modifikatsioone, mis suurendavad HA poolväärtusaega kudedes.3 Enamik neist modifikatsioonidest üritab vähendada hüaluronidaasi juurdepääsu polüsahhariidpolümeeridele, ristsidestades HA-ahelaid.Seetõttu toodab ristseotud HA hüdrogeel sildade moodustumise ja molekulidevaheliste kovalentsete sidemete tõttu HA struktuuri ja ristsiduva aine vahel rohkem ensüümivastaseid lagunemissaadusi kui looduslik HA.4-6
Siiani on ristseotud HA tootmiseks kasutatud keemiliste ristsiduvate ainete hulka kuulunud metakrüülamiid, 7 hüdrasiid, 8 karbodiimiid, 9 divinüülsulfoon, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter (BDDE) ja polü(etüleenglükool) diglütsidüüleeter.10,11 BDDE on praegu kõige sagedamini kasutatav ristsildav aine.Kuigi seda tüüpi hüdrogeelide ohutus on tõestatud aastakümneid, on kasutatavad ristsiduvad ained reaktiivsed reaktiivid, mis võivad olla tsütotoksilised ja mõnel juhul mutageensed.12 Seetõttu peab nende jääksisaldus lõplikus hüdrogeelis olema kõrge.BDDE loetakse ohutuks, kui jääkkontsentratsioon on alla 2 miljondikosa (ppm).4
Madala jäägiga BDDE kontsentratsiooni, ristsidumise astme ja asendusasendi tuvastamiseks HA hüdrogeelides on mitu meetodit, näiteks gaasikromatograafia, suuruseralduskromatograafia koos massispektromeetriaga (MS), tuumamagnetresonantsi (NMR) fluorestsentsi mõõtmismeetodid ja Dioodimassiiviga sidestatud kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (HPLC).13-17 See uuring kirjeldab kõrvalsaaduse tuvastamist ja iseloomustamist lõplikus ristseotud HA hüdrogeelis, mis on toodetud BDDE ja HA reaktsioonil aluselistes tingimustes.HPLC ja vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS analüüs).Kuna selle BDDE kõrvalsaaduse toksilisus ei ole teada, soovitame selle jääkide kvantifitseerimise määrata sarnaselt meetodile, mida tavaliselt tehakse lõpptootes BDDE puhul.
Saadud HA naatriumsoola (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Jaapan) molekulmass on ~1 368 000 Da (Laurent'i meetod)18 ja sisemine viskoossus 2,20 m3/kg.Ristsidumise reaktsiooni jaoks osteti BDDE (≥95%) ettevõttelt Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Fosfaatpuhverdatud soolalahus pH väärtusega 7,4 osteti firmalt Sigma-Aldrich Company.Kõik LC-MS analüüsis kasutatud lahustid, atsetonitriil ja vesi osteti HPLC kvaliteediga.Sipelghape (98%) ostetakse reaktiiviklassina.
Kõik katsed viidi läbi UPLC Acquity süsteemiga (Waters, Milford, MA, USA) ja ühendati API 3000 kolmekordse kvadrupooli massispektromeetriga, mis oli varustatud elektropihustus-ionisatsiooniallikaga (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Ristseotud HA hüdrogeelide sünteesi alustati 198 mg BDDE lisamisega 10% (w/w) naatriumhüaluronaadi (NaHA) lahusele 1% leelise (naatriumhüdroksiid, NaOH) juuresolekul.BDDE lõppkontsentratsioon reaktsioonisegus oli 9,9 mg/ml (0,049 mM).Seejärel segati reaktsioonisegu põhjalikult ja homogeniseeriti ning lasti kulgeda temperatuuril 45 °C 4 tundi.19 Reaktsiooni pH hoitakse ~12 juures.
Seejärel pesti reaktsioonisegu veega ja lõplik HA-BDDE hüdrogeel filtriti ja lahjendati PBS puhvriga, et saavutada HA kontsentratsioon 10 kuni 25 mg/ml ja lõplik pH 7,4.Toodetud ristseotud HA hüdrogeelide steriliseerimiseks autoklaavitakse kõik need hüdrogeelid (120 °C 20 minutit).Puhastatud BDDE-HA hüdrogeeli hoitakse analüüsini temperatuuril 4 °C.
Ristseotud HA tootes sisalduva BDDE analüüsimiseks kaaluti 240 mg proov ja sisestati keskmisse auku (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; maht 0,5 ml) ja tsentrifuugiti toatemperatuuril kiirusel 10 000 pööret minutis. 10 minutit.Kokku koguti ja analüüsiti 20 µl allatõmmatavat vedelikku.
BDDE standardi (Sigma-Aldrich Co) analüüsimiseks leeliselistes tingimustes (1%, 0,1% ja 0,01% NaOH), kui on täidetud järgmised tingimused, on vedelikuproov 1:10, 1:100 või kuni 1:1 000 000 Vajadusel kasutage analüüsiks MilliQ deioniseeritud vett.
Ristsidumisreaktsioonis kasutatud lähteainete (HA 2%, H2O, 1% NaOH ja 0,049 mM BDDE) puhul analüüsiti 1 ml igast nendest materjalidest valmistatud proovist samu analüüsitingimusi.
Ioonikaardil olevate piikide spetsiifilisuse määramiseks lisati 20 µl proovile 10 µl 100 ppb BDDE standardlahust (Sigma-Aldrich Co).Sellisel juhul on standardi lõppkontsentratsioon igas proovis 37 ppb.
Esiteks valmistage BDDE põhilahus kontsentratsiooniga 11 000 mg/L (11 000 ppm), lahjendades 10 μL standardset BDDE-d (Sigma-Aldrich Co) 990 μL MilliQ veega (tihedus 1,1 g/mL).Kasutage seda lahust 110 µg/L (110 ppb) BDDE lahuse valmistamiseks standardlahjendusena.Seejärel kasutage standardkõvera koostamiseks BDDE vahelahjendit (110 ppb), lahjendades vahelahjendit mitu korda, et saavutada soovitud kontsentratsioon 75, 50, 25, 10 ja 1 ppb.Nagu on näidatud joonisel 1, leiti, et BDDE standardkõveral vahemikus 1,1 kuni 110 ppb on hea lineaarsus (R2>0,99).Standardkõverat korrati neljas sõltumatus katses.
Joonis 1 LC-MS analüüsiga saadud BDDE standardne kalibreerimiskõver, milles täheldatakse head korrelatsiooni (R2>0,99).
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria.
Ristseotud HA-s sisalduvate BDDE standardite ja aluslahuses sisalduvate BDDE standardite tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks kasutati LC-MS analüüsi.
Kromatograafiline eraldamine viidi läbi LUNA 2,5 µm C18(2)-HST kolonnis (50 x 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) ja seda hoiti analüüsi ajal toatemperatuuril (25 °C).Liikuv faas koosneb atsetonitriilist (lahusti A) ja veest (lahusti B), mis sisaldab 0,1% sipelghapet.Liikuv faas elueeritakse gradientelueerimisega.Gradient on järgmine: 0 minutit, 2% A;1 minut, 2% A;6 minutit, 98% A;7 minutit, 98% A;7,1 minutit, 2% A;10 minutit, 2% A. Tööaeg on 10 minutit ja süstimismaht on 20 µL.BDDE retentsiooniaeg on umbes 3,48 minutit (vahemikus 3,43 kuni 4,14 minutit katsete põhjal).Liikuv faas pumbati LC-MS analüüsi jaoks voolukiirusel 0,25 ml/min.
BDDE analüüsiks ja kvantifitseerimiseks MS abil kombineeritakse UPLC-süsteem (Waters) API 3000 kolmekordse kvadrupoolse massispektromeetriga (AB SCIEX), mis on varustatud elektropihustus-ionisatsiooniallikaga, ja analüüs viiakse läbi positiivse iooni režiimis (ESI+).
BDDE-ga tehtud ioonifragmentide analüüsi kohaselt määrati suurima intensiivsusega fragmentideks fragment, mis vastab 129,1 Da-le (joonis 6).Seetõttu on kvantifitseerimise mitme iooni seirerežiimis (MIM) BDDE massi muundamine (massi ja laengu suhe [m/z]) 203,3/129,1 Da.Samuti kasutab see LC-MS analüüsi jaoks täieliku skaneerimise (FS) ja toote ioonide skaneerimise (PIS) režiimi.
Meetodi spetsiifilisuse kontrollimiseks analüüsiti pimeproovi (esialgne liikuv faas).Pimeproovis massikonversiooniga 203,3/129,1 Da signaali ei tuvastatud.Seoses katse korratavusega analüüsiti 10 standardsüsti 55 ppb (kalibreerimiskõvera keskel), mille tulemuseks oli jääkstandardhälve (RSD) <5% (andmeid pole näidatud).
BDDE jääksisaldus kvantifitseeriti kaheksas erinevas autoklaavitud BDDE ristseotud HA hüdrogeelis, mis vastab neljale sõltumatule katsele.Nagu on kirjeldatud jaotises „Materjalid ja meetodid”, hinnatakse kvantifitseerimist BDDE standardlahjenduse regressioonikõvera keskmise väärtusega, mis vastab ainulaadsele piigile, mis tuvastati BDDE massisiirde korral 203,3/129,1 Da koos retentsiooniga. aeg 3,43 kuni 4,14 minutit Ei oota.Joonisel 2 on näidatud 10 ppb BDDE etalonstandardi kromatogrammi näidis.Tabelis 1 on kokku võetud kaheksa erineva hüdrogeeli BDDE jääksisaldus.Väärtuste vahemik on 1 kuni 2,46 ppb.Seetõttu on BDDE jääkkontsentratsioon proovis inimtarbimiseks vastuvõetav (<2 ppm).
Joonis 2 10 ppb BDDE etalonstandardi (Sigma-Aldrich Co) ioonkromatogramm, MS (m/z) üleminek, mis saadi LC-MS analüüsiga 203,30/129,10 Da (positiivses MRM-režiimis).
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine;MS, mass;m/z, massi ja laengu suhe.
Märkus. Proovid 1–8 on autoklaavitud BDDE ristseotud HA hüdrogeelid.Samuti on teatatud BDDE jääkkogusest hüdrogeelis ja BDDE retentsiooniaja tipust.Lõpuks teatatakse ka uute erinevate peetumisaegadega piikide olemasolust.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;HA, hüaluroonhape;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine;tR, retentsiooniaeg;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;RRT, suhteline retentsiooniaeg.
Üllataval kombel näitas LC-MS ioonkromatogrammi analüüs, et kõigi analüüsitud autoklaavitud ristseotud HA hüdrogeeli proovide põhjal oli lisapiik lühema retentsiooniaja juures 2,73 kuni 3,29 minutit.Näiteks joonisel fig 3 on näidatud ristseotud HA proovi ioonkromatogramm, kus täiendav piik ilmub erineva retentsiooniaja juures, mis on ligikaudu 2,71 minutit.Täheldatud suhteline retentsiooniaeg (RRT) äsja vaadeldud piigi ja BDDE piigi vahel leiti olevat 0,79 (tabel 1).Kuna me teame, et äsja täheldatud piik on LC-MS analüüsis kasutatud C18 kolonnis vähem säilinud, võib uus piik vastata polaarsemale ühendile kui BDDE.
Joonis 3 LC-MS-ga saadud ristseotud HA hüdrogeeli proovi ioonkromatogramm (MRM massikonversioon 203,3/129,0 Da).
Lühendid: HA, hüaluroonhape;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine;RRT, suhteline retentsiooniaeg;tR, retentsiooniaeg.
Välistamaks võimalust, et täheldatud uued piigid võivad olla kasutatud tooraines algselt esinenud saasteained, analüüsiti ka neid tooraineid sama LC-MS analüüsimeetodi abil.Analüüsitud lähteainete hulka kuuluvad vesi, 2% NaHA vees, 1% NaOH vees ja BDDE sama kontsentratsiooniga, mida kasutati ristsidumise reaktsioonis.Kasutatud lähtematerjali ioonkromatogramm ei näidanud ühtegi ühendit ega piiki ning selle retentsiooniaeg vastab uuele vaadeldud piigile.See asjaolu lükkab ümber mõtte, et mitte ainult lähtematerjal ei pruugi sisaldada mingeid ühendeid või aineid, mis võivad analüüsiprotseduuri segada, vaid ei ole märke võimalikust ristsaastumisest teiste laboritoodetega.Pärast BDDE ja uute piikide LC-MS analüüsi saadud kontsentratsiooniväärtused on näidatud tabelis 2 (proovid 1-4) ja ioonkromatogramm joonisel 4.
Märkus. Proovid 1–4 vastavad autoklaavitud BDDE ristseotud HA hüdrogeelide tootmiseks kasutatud toorainetele.Neid proove ei autoklaavitud.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;HA, hüaluroonhape;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine.
Joonis 4 vastab HA ja BDDE ristsidumise reaktsioonis kasutatud toormaterjali proovi LC-MS kromatogrammile.
Märkus. Kõiki neid mõõdetakse sama kontsentratsiooni ja suhtega, mida kasutatakse ristsidumise reaktsiooni läbiviimiseks.Kromatogrammi järgi analüüsitud toorainete arvud vastavad: (1) vesi, (2) 2% HA vesilahus, (3) 1% NaOH vesilahus.LC-MS analüüs viiakse läbi massikonversiooniks 203,30/129,10 Da (positiivses MRM-režiimis).
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;HA, hüaluroonhape;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine.
Uuriti tingimusi, mis viisid uute tippude tekkeni.Selleks, et uurida, kuidas ristseotud HA hüdrogeeli tootmiseks kasutatud reaktsioonitingimused mõjutavad BDDE ristsiduva aine reaktsioonivõimet, mille tulemusel tekivad uued piigid (võimalikud kõrvalsaadused), viidi läbi erinevad mõõtmised.Nendes määramistes uurisime ja analüüsisime lõplikku BDDE ristsildajat, mida töödeldi erinevate kontsentratsioonidega NaOH (0%, 1%, 0,1% ja 0,01%) vesikeskkonnas, millele järgnes autoklaavimine või ilma.Bakterite protseduur samade tingimuste simuleerimiseks on sama, mis ristseotud HA hüdrogeeli tootmiseks kasutatud meetod.Nagu on kirjeldatud jaotises "Materjalid ja meetodid", analüüsiti proovi massi üleminekut LC-MS abil väärtuseni 203,30/129,10 Da.Arvutatakse BDDE ja uue piigi kontsentratsioon ning tulemused on toodud tabelis 3. Autoklaavimata proovides uusi piike ei tuvastatud, olenemata NaOH sisaldusest lahuses (proovid 1-4, tabel 3).Autoklaavitud proovide puhul tuvastatakse uued piigid ainult NaOH juuresolekul lahuses ja piigi moodustumine näib sõltuvat NaOH kontsentratsioonist lahuses (proovid 5-8, tabel 3) (RRT = 0,79).Joonisel 5 on kujutatud ioonkromatogrammi näide, mis näitab kahte autoklaavitud proovi NAOH juuresolekul või puudumisel.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine.
Märkus. Ülemine kromatogramm: proovi töödeldi 0,1% NaOH vesilahusega ja autoklaaviti (120 °C 20 minutit).Alumine kromatogramm: proovi ei töödeldud NaOH-ga, vaid autoklaaviti samadel tingimustel.Massi konversiooni 203,30/129,10 Da (positiivses MRM-režiimis) analüüsiti LC-MS abil.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine.
Kõigis autoklaavitud proovides, koos NaOH-ga või ilma, vähenes BDDE kontsentratsioon oluliselt (kuni 16,6 korda) (proovid 5-8, tabel 2).BDDE kontsentratsiooni langus võib olla tingitud asjaolust, et kõrgel temperatuuril võib vesi toimida alusena (nukleofiilina), mis avab BDDE epoksiiditsükli, moodustades 1,2-dioolühendi.Selle ühendi monoisotoopne kvaliteet erineb BDDE omast ja seetõttu see ei muutu.LC-MS tuvastas massinihke 203,30/129,10 Da.
Lõpuks näitavad need katsed, et uute piikide teke sõltub BDDE, NAOH olemasolust ja autoklaavimisprotsessist, kuid sellel pole midagi pistmist HA-ga.
Uut piiki, mis leiti retentsiooniajal ligikaudu 2,71 minutit, iseloomustati seejärel LC-MS abil.Sel eesmärgil inkubeeriti BDDE-d (9,9 mg/ml) 1% NaOH vesilahuses ja autoklaaviti.Tabelis 4 on uue piigi omadusi võrreldud teadaoleva BDDE võrdluspiigiga (retentsiooniaeg ligikaudu 3,47 minutit).Kahe piigi ioonide fragmentatsioonianalüüsi põhjal võib järeldada, et 2,72-minutilise retentsiooniajaga piik näitab samu fragmente, mis BDDE piigil, kuid erineva intensiivsusega (joonis 6).Piigi puhul, mis vastab retentsiooniajale (PIS) 2,72 minutit, täheldati intensiivsemat piiki pärast killustumist massiga 147 Da.Selles määramises kasutatud BDDE kontsentratsiooni (9,9 mg/ml) juures täheldati pärast kromatograafilist eraldamist ka erinevaid neeldumisrežiime (UV, λ=200 nm) ultraviolettspektris (joonis 7).Piik retentsiooniajaga 2,71 minutit on endiselt nähtav 200 nm juures, samas kui BDDE piiki ei saa samadel tingimustel kromatogrammil jälgida.
Tabel 4 Uue piigi, mille retentsiooniaeg on umbes 2,71 minutit ja BDDE piigi, mille retentsiooniaeg on 3,47 minutit, iseloomustustulemused
Märkus. Nende tulemuste saamiseks viidi kahe piigiga läbi LC-MS ja HPLC analüüsid (MRM ja PIS).HPLC analüüsiks kasutatakse UV-detektorit lainepikkusega 200 nm.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;HPLC, kõrgsurvevedelikkromatograafia;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine;m/z, massi ja laengu suhe;PIS, toode Ioonide skaneerimine;ultraviolettvalgus, ultraviolettvalgus.
Märkus. Massi fragmendid saadakse LC-MS analüüsiga (PIS).Ülemine kromatogramm: BDDE standardproovi fragmentide massispekter.Alumine kromatogramm: tuvastatud uue piigi massispekter (BDDE piigiga seotud RRT on 0,79).BDDE töödeldi 1% NaOH lahuses ja autoklaaviti.
Lühendid: BDDE, 1,4-butaandiooldiglütsidüüleeter;LC-MS, vedelikkromatograafia ja massispektromeetria;MRM, mitme reaktsiooni jälgimine;PIS, toote ioonide skaneerimine;RRT, suhteline retentsiooniaeg.
Joonis 7 203,30 Da prekursoriooni ioonkromatogramm ja (A) uus piik retentsiooniajaga 2,71 minutit ja (B) BDDE etalonstandardi piigi UV-tuvastus 3,46 minuti juures 200 nm juures.
Kõigis toodetud ristseotud HA hüdrogeelides täheldati, et BDDE jääkkontsentratsioon pärast LC-MS kvantifitseerimist oli <2 ppm, kuid analüüsis ilmnes uus tundmatu piik.See uus tipp ei ühti BDDE standardtootega.BDDE standardtoode on läbinud ka sama kvaliteedikonversiooni (MRM konversioon 203.30/129.10 Da) positiivses MRM režiimis.Üldiselt kasutatakse hüdrogeelides BDDE tuvastamiseks piirtestidena muid analüütilisi meetodeid, näiteks kromatograafiat, kuid maksimaalne avastamispiir (LOD) on veidi madalam kui 2 ppm.Teisest küljest on seni kasutatud NMR-i ja MS-i HA ristsidumise ja/või modifitseerimise määra iseloomustamiseks ristseotud HA toodete suhkruühiku fragmentides.Nende meetodite eesmärk ei ole kunagi olnud BDDE jääktuvastuse kvantifitseerimine nii madalatel kontsentratsioonidel, nagu me selles artiklis kirjeldame (meie LC-MS meetodi LOD = 10 ppb).
Postitusaeg: 01.09.2021